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. 2007 Jan;71(1):28-33.

Evaluation of equine papillomas, aural plaques, and sarcoids for the presence of Equine papillomavirus DNA and Papillomavirus antigen

Rosemary C Postey  1 , Greg D Appleyard, Beverly A Kidney
Affiliations

Evaluation of equine papillomas, aural plaques, and sarcoids for the presence of Equine papillomavirus DNA and Papillomavirus antigen

Rosemary C Postey et al. Can J Vet Res. 2007 Jan.

Abstract
in English, French

Immunohistochemical (IHC) testing and electron microscopy have implicated Papillomavirus (PV) as the etiologic agent for equine papillomas and aural plaques, but Equine papillomavirus (EPV) DNA has yet to be demonstrated in these lesions by polymerase chain reaction (PCR). The purpose of this study was to evaluate formalin-fixed, paraffin-embedded tissues from naturally occurring cases of equine papillomas, aural plaques, and sarcoids for the presence of EPV DNA by means of PCR and for the presence of PV antigen by means of IHC testing. We used EPV-specific primers that amplified a region of 384 base pairs (bp) spanning the E4 and L2 genes of the EPV genome and consensus PV primers that amplified a 102-bp region of the L1 gene. Group-specific PV structural antigens were detected with the use of a streptavidin-biotin-alkaline phosphatase IHC stain. With IHC testing, 23 of 38 papillomas, 4 of 9 aural plaques, and 0 of 10 sarcoids were positive for PV antigen; EPV DNA was found in 20 of the 38 papillomas and 1 of the 10 sarcoids but 0 of the 9 aural plaques. The consensus primers did not amplify novel PV DNA in any of the tissues. Nucleotide sequencing of viral DNA from 7 papillomas amplified with EPV-specific primers revealed DNA fragments that were 96% to 99% identical to known EPV sequences. Some samples had nucleotide substitutions in common, which suggests infection with related strains. Together, EPV DNA or PV antigen (or both) was demonstrated in 26 (68%) of the 38 equine papillomas. Although aural plaques contained PV antigen, they were negative for EPV DNA; therefore, we hypothesize that aural plaques contain a PV distinct from EPV.

Les épreuves immunohistochimiques (IHC) et la microscopie électronique ont mis en cause le Papillomavirus (PV) comme agent étiologique des papillomes équins et des plaques auriculaires (papillomes de l’oreille), mais l’ADN du papillomavirus équin (EPV) n’a pas encore été mis en évidence par réaction d’amplification en chaîne par la polymérase (PCR) dans ces lésions. Le but de l’étude était d’évaluer la présence d’ADN de l’EPV par épreuve PCR et la présence d’antigène du PV par épreuve IHC dans des tissus fixés à la formaline et paraffinés provenant de cas cliniques de papillomes équins, de plaques auriculaires et de sarcoïdes. Des amorces spécifiques à EPV amplifiant une région de 384 paires de bases (bp) couvrant les gènes E4 et L2 du génome d’EPV et des amorces consensus du PV amplifiant une région de 102 bp du gène L1 ont été utilisées. Les antigènes structuraux spécifiques de groupe du PV ont été détectés en IHC par coloration à la streptavidine–biotine–phosphatase alcaline. Par épreuve IHC, 23 des 38 papillomes, 4 des 9 plaques auriculaires et 0 des 10 sarcoïdes étaient positifs pour la présence d’antigène du PV; l’ADN d’EPV a été trouvé dans 20 des 38 papillomes, 1 des 10 sarcoïdes et 0 des 9 plaques auriculaires. Les amorces consensus n’ont pas amplifiées d’ADN nouveaux de PV dans aucun des tissus. Le séquençage nucléotidique de l’ADN viral amplifié provenant de 7 papillomes avec les amorces spécifiques à EPV a révélé des fragments d’ADN de 96 % à 99 % identiques à des séquences connues d’EPV. Quelques cas avaient des substitutions nucléotidiques en commun, ce qui suggère une infection par des souches reliées. Dans l’ensemble, l’ADN d’EPV ou l’antigène de PV (ou les deux) ont été démontrés dans 26 (68 %) des 38 papillomes équins. Bien que les plaques auriculaires contenaient de l’antigène de PV, elles se sont avérées négatives pour la présence d’ADN d’EPV; ainsi, l’hypothèse est émise que les plaques auriculaires contiennent un PV distinct de l’EPV.

(Traduit par Docteur Serge Messier)

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Figures

Figure 1
Figure 1
Photomicrograph of an ethidium-bromide-stained agarose gel of polymerase chain reaction products obtained with use of an Equine papillomavirus primer set. Lane M is a 100-base-pair (bp) DNA ladder; lanes 1 to 4 represent DNA from normal equine skin, sarcoid, aural plaque, and papilloma, respectively; lane 5 is a negative control (no DNA); and lane 6 is amplified DNA from the positive control.
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