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. 2021 Apr;32(2):131-e29.
doi: 10.1111/vde.12902. Epub 2020 Oct 28.

Specific Dermatophagoides farinae extract for canine immunotherapy

Raquel Moya  1 , Laura Ramió-Lluch  2 , Nuria Parody  1 , Pilar Brazis  2 , Anna Puigdemont  3 , Jerónimo Carnés  1
Affiliations

Specific Dermatophagoides farinae extract for canine immunotherapy

Raquel Moya et al. Vet Dermatol. 2021 Apr.

Abstract
in English, French, Spanish, German, Japanese, Chinese, Portuguese

Background: Canine atopic dermatitis (cAD) is a pruritic allergic skin disease most often caused by Dermatophagoides farinae. Differences in the sensitization profile to D. farinae have been reported between people and dogs. However, allergic dogs traditionally have been treated with extracts intended for human immunotherapy.

Hypothesis/objectives: To develop a specific allergen immunotherapy for veterinary practice enriched in canine major allergens and to demonstrate its in vitro efficacy.

Animals: Twenty privately owned dogs, clinically diagnosed with cAD, and three healthy dogs.

Methods and materials: A veterinary D. farinae allergen extract was manufactured and characterized compared to D. farinae extract used for human immunotherapy. The protein profile was analysed by SDS-PAGE and size exclusion chromatography and Der f 15 and Der f 18 allergens quantified by mass spectrometry. The allergenic profile was studied by immunoblot and the biological potency by enzyme-linked immunosorbent assay-inhibition assays. The extract's capacity to induce cytokine production [interleukin (IL)-10, interferon (IFN)-Ɣ] by peripheral blood mononuclear cells also was evaluated.

Results: The veterinary extract showed a higher content of high molecular weight proteins, preferentially recognized by atopic dog sera. The fold-increases in Der f 15 and Der f 18 with respect to the human extract were 2.07 ± 0.32 and 1.63 ± 0.15, respectively. The veterinary extract showed higher biological potency (0.062 versus 0.132 µg required for 50% inhibition of dogs sera) compared to the human extract and induced significantly higher levels of IL-10 (1,780 pg/mL) and IFN-Ɣ (50.4 pg/mL) with respect to the negative control.

Conclusions and clinical importance: A veterinary D. farinae extract with a higher content of dog major allergens was developed and in vitro efficacy demonstrated by immunological parameters.

Contexte: La dermatite atopique canine (CAD) est une maladie cutanée allergique prurigineuse souvent causée par Dermatophagoides farinae. Des différences dans le profil de sensibilisation à D. farinae ont été rapportées entre le chien et l’homme. Cependant, les chiens allergiques ont été traditionnellement traités avec des extraits conçus pour immunothérapie de humaine. HYPOTHÈSES/OBJECTIFS: Développer une immunothérapie spécifique d’allergènes vétérinaire enrichie en allergènes majeurs du chien et démontrer son efficacité in vitro.

Sujets: Vingt chiens de propriétaires diagnostiqués atopiques et trois chiens sains. MATÉRIELS ET MÉTHODES: Un extrait allergénique vétérinaire de D. farinae a été conçu et caractérisé en comparaison avec l’extrait de D. farinae utilisé pour l’immunothérapie humaine. Le profil protéique a été analysé par SDS-PAGE et chromatographie d’exclusion de taille et les allergènes Der f 15 et Der f 18 quantifiés par spectrométrie de masse. Le profil allergénique a été étudié par immunoblot et le potentiel biologique par ELISA. La capacité des extraits à induire la production de cytokine [interleukine (IL)-10, interferon (IFN)-Ɣ] par les cellules mononucléées sanguines périphériques a aussi été évaluée. RÉSULTATS: L’extrait vétérinaire a montré un contenu de protéines à haut poids moléculaire plus élevé, préférentiellement reconnu pas les sera de chiens atopiques. L’augmentation de Der f 15 et Der f 18 était respectivement multipliée par 2.07±0.32 et 1.63±0.15 comparé aux extraits de l’homme. L’extrait vétérinaire a montré un potentiel biologique plus élevé (0.062 versus 0.132 µg nécessaire pour 50% d’inhibition des sera de chien) comparé à l’extrait humain et induit des taux d’ IL-10 (1780 pg/mL) et IFN-Ɣ (50.4 pg/mL) significativement plus élevés en comparaison avec les contrôles négatifs.

Conclusions et importance clinique: Un extrait vétérinaire de D. farinae avec un contenu plus élevé d’allergènes majeurs a été développé et une efficacité in vitro a été démontrée par paramètres immunologiques.

INTRODUCCIÓN: la dermatitis atópica canina (CAD) es una enfermedad cutánea alérgica pruriginosa causada con mayor frecuencia por Dermatophagoides farinae. Se han publicado diferencias en el perfil de sensibilización a D. farinae entre personas y perros. Sin embargo, los perros alérgicos tradicionalmente han sido tratados con extractos destinados a la inmunoterapia humana. HIPÓTESIS/OBJETIVOS: Desarrollar una inmunoterapia con alérgenos específicos para la práctica veterinaria enriquecida en los principales alérgenos caninos y demostrar su eficacia in vitro. ANIMALES: veinte perros de propietarios privados, diagnosticados clínicamente con CAD y tres perros sanos. MÉTODOS Y MATERIALES: se fabricó y caracterizó un extracto de alérgeno veterinario de D. farinae en comparación con el extracto de D. farinae utilizado para inmunoterapia humana. El perfil de proteínas se analizó mediante SDS-PAGE y cromatografía de exclusión por tamaño y los alérgenos Der f 15 y Der f 18 se cuantificaron mediante espectrometría de masas. El perfil alergénico se estudió mediante inmunotransferencia y la potencia biológica mediante ensayos de inhibición por ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. También se evaluó la capacidad del extracto para inducir la producción de citoquinas [interleuquina (IL)-10, interferón (IFN)-Ɣ] por células mononucleares de sangre periférica. RESULTADOS: El extracto veterinario mostró un mayor contenido de proteínas de alto peso molecular, reconocidas preferentemente por sueros de perros atópicos. Los factores de aumento en Der f 15 y Der f 18 con respecto al extracto humano fueron 2,07 ± 0,32 y 1,63 ± 0,15, respectivamente. El extracto veterinario mostró una mayor potencia biológica (0,062 versus 0,132 µg requeridos para una inhibición del 50% de los sueros de perros) en comparación con el extracto humano e indujo niveles significativamente más altos de IL-10 (1780 pg/mL) e IFN-Ɣ (50,4 pg/mL). ) con respecto al control negativo. CONCLUSIONES E IMPORTANCIA CLÍNICA: Se desarrolló un extracto veterinario de D. farinae con un mayor contenido de los principales alérgenos caninos y se demostró la eficacia in vitro mediante parámetros inmunológicos.

Hintergrund: Die atopische Dermatitis des Hundes (CAD) ist eine juckende allergische Hauterkrankung, die am häufigsten durch Dermatophagoides farinae verursacht wird. Unterschiede zwischen Mensch und Hund im Sensibilisierungsprofil durch D. farinae wurden bereits beschrieben. Nichtsdestotrotz wurden Hunde traditionellerweise mit Extrakten behandelt, die für die Immuntherapie des Menschen gedacht waren.

Hypothese/ziele: Die Entwicklung einer spezifischen Allergenimmuntherapie für die veterinärmedizinische Praxis, die durch wichtige Allergene bereichert wird und die Demonstration ihrer Wirksamkeit in vitro.

Tiere: Zwanzig Hunde in Privatbesitz, die klinisch mit einer CAD diagnostiziert worden waren und drei gesunde Hunde.

Methoden und materialien: Es wurde ein veterinärmedizinischer D. farinae Allergenextrakt hergestellt und im Vergleich zu einem D. farinae Extrakt, der in der Humanmedizin zur Immuntherapie Verwendung findet, beschrieben. Das Proteinprofil wurde mittels SDS-PAGE und Größenausschlußchromatografie analysiert und Der f 15 und Der f 18 Allergene mittels Massenspektrometrie quantifiziert. Das Allergenprofil wurde mittels Immunoblot und die biologische Potenz mittels Enzym-linked Immunosorbent Assay-Inhibitionsassays untersucht. Die Fähigkeit des Extraktes eine Zytokinproduktion [Interleukin (IL)-10, Interferon (IFN)- ¥] zu induzieren wurde mittels peripherer mononukleärer Zellen des Blutes ebenfalls evaluiert.

Ergebnisse: Der veterinärmedizinische Extrakt zeigte einen höheren Gehalt an hochmolekularen Proteinen, welche vorzugsweise durch atopische Sera von Hunden erkannt wurden. Das Ausmaß der Zunahme von Der f 15 und Der f 18 in Bezug auf den humanen Extrakt betrug das 2,07±0,32 bzw das 1,63±0,15 fache. Der veterinärmedizinische Extrakt zeigte im Vergleich zum Humanextrakt eine höhere biologische Potenz (0,062 versus 0,132 µg waren nötig um eine 50%ige Inhibition der Hunde Sera zu erlangen) und induzierte signifikant höhere Werte an IL-10 (1789 pg/mL) und IFN-¥ (50,4 pg/mL) im Vergleich zur Negativkontrolle.

Schlussfolgerungen und klinische bedeutung: Es wurde ein veterinärmedizinischer D. farinae Extrakt mit einem höheren Gehalt an caninen hochmolekularen Allergenen und seine Wirksamkeit in vitro mittels immunologischer Parameter demonstriert.

背景: 犬アトピー性皮膚炎（CAD）は、しばしばDermatophagoides farinaeが原因となる掻痒性アレルギー性皮膚疾患である。 D. farinaeに対する感作プロファイルの違いは、人と犬の間で報告されている。しかしながら、アレルギー犬は伝統的にヒト免疫療法を目的とした抽出物で治療されてきた。 仮説/目的: 本研究の目的は、犬の主要アレルゲンが豊富な獣医療向け特定アレルゲン免疫療法を開発し、in vitro効果を実証することであった。 供試動物: 臨床的にCADと診断された20頭の私有犬および3頭の健常犬。 材料と方法: 獣医療向けD. farinaeアレルゲン抽出物を製造し、ヒト免疫療法に使用されるD. farinae抽出物と比較して特徴付けられた。タンパク質プロファイルをSDS-PAGEおよびサイズ排除クロマトグラフィー法で分析し、Der f 15およびDer f 18アレルゲンを質量分析法で定量した。アレルゲンプロファイルは、イムノブロット法および酵素結合免疫吸着アッセイ阻害アッセイ法による生物学的効力によって研究された。末梢血単核球によるサイトカイン産生[インターロイキン（IL）-10、インターフェロン（IFN）-Ɣ]を誘導する抽出物の能力も評価された。 結果: 獣医療向け抽出物は高分子量タンパク質の含有量が高く、アトピー犬の血清によって優先的に認識された。ヒト抽出物に対するDer f 15およびDer f 18の倍率増加は、それぞれ2.07±0.32および1.63±0.15であった。獣医診療向け抽出物は、ヒト抽出物と比較してより高い生物学的効力（犬血清の50％阻害に必要な0.062 µg対0.132 µg）を示し、ネガティブコントロールと比較して有意に高いIL-10（1780 pg / mL）およびIFN-γ（50.4 pg / mL）を誘導した。 結論と臨床的重要性: 犬の主要アレルゲン含有量が高い獣医療向けD. farinae抽出物が開発され、in vitroでの有効性が免疫学的パラメーターによって実証された。.

背景: 犬特应性皮炎 （CAD） 是一种瘙痒过敏性皮肤病，通常由粉尘螨（Dermatophagoides farinae）引起。据报道，人和犬对粉尘螨的敏感特征存在差异。然而传统上，过敏犬用人类免疫治疗的提取物进行治疗。 假设/目标: 开发兽医临床中的特异性过敏原免疫疗法，富集犬主要过敏原，并证明其体外疗效。 动物: 临床诊断为CAD的20只私家犬，以及三只健康犬。 方法和材料: 生产兽医用粉尘螨过敏原提取物，并与用于人免疫治疗的粉尘螨提取物进行特征比较。通过SDS-PAGE和分子排阻色谱法分析蛋白图谱，并通过质谱法定量测定Der f 15和Der f 18过敏原。通过免疫印迹研究过敏原特征，通过酶联免疫吸附试验-抑制试验研究生物效价。还评价了提取物诱导外周血单核细胞产生细胞因子[白细胞介素(IL)-10、干扰素(IFN)-α]的能力。 结果: 兽医用提取物显示高分子量蛋白质含量较高，可优先得到特异性犬血清的识别。Der f 15 和 Der f 18 的折叠增加值与人用提取物的分别是 2.07±0.32 和 1.63±0.15。与人用提取物相比，兽医用提取物显示出较高的生物效力（0.062对0.132 μg，达到犬血清50%抑制），并且，与阴性控制相比，诱导IL-10（1780 pg/mL）和 IFN-Ɣ（50.4 pg/mL）水平显著提高。 结论和临床重要性: 开发兽医用粉尘螨提取物，其中犬主要过敏原含量较高，并通过免疫学参数证明其体外功效。.

Contexto: A dermatite atópica canina (DAC) é uma doença cutânea alérgica pruriginosa, mais frequentemente causada por Dermatophagoides farinae. Diferenças no perfil de sensibilização a D. farinae foram relatadas entre pessoas e cães. No entanto, os cães alérgicos tradicionalmente têm sido tratados com extratos destinados à imunoterapia humana. HIPÓTESE/OBJETIVOS: Desenvolver uma imunoterapia alérgeno-específica para a prática veterinária formulada com os principais alérgenos caninos e demonstrar sua eficácia in vitro.

Animais: Vinte cães de propriedade privada, com diagnóstico clínico de DAC, e três cães saudáveis. MÉTODOS E MATERIAIS: O extrato de alergênico veterinário de D. farinae foi fabricado e caracterizado em comparação com o extrato de D. farinae usado para imunoterapia humana. O perfil proteico foi analisado por SDS-PAGE e cromatografia de exclusão por tamanho e os alérgenos Der f 15 e Der f 18 quantificados por espectrometria de massa. O perfil alergênico foi estudado por immunoblot e a potência biológica por ensaio de imunoabsorção enzimática. A capacidade do extrato de induzir a produção de citocinas [interleucina (IL) -10, interferon (IFN) -Ɣ] por células mononucleares do sangue periférico também foi avaliada.

Resultados: O extrato veterinário apresentou maior teor de proteínas de alto peso molecular, preferencialmente reconhecidas por soros de cães atópicos. Os aumentos de Der f 15 e Der f 18 em relação ao extrato humano foram 2,07 ± 0,32 e 1,63 ± 0,15, respectivamente. O extrato veterinário mostrou maior potência biológica (0,062 versus 0,132 µg necessário para 50% de inibição de soros de cães) em comparação com o extrato humano e induziu níveis significativamente mais elevados de IL-10 (1780 pg/mL) e IFN-Ɣ (50,4 pg/mL)) com relação ao controle negativo. CONCLUSÕES E IMPORTÂNCIA CLÍNICA: Um extrato alergênico veterinário de D. farinae com uma maior quantidade dos principais alérgenos para cães foi desenvolvido e a eficácia in vitro demonstrada por parâmetros imunológicos.

PubMed Disclaimer

References

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